熒光定量PCR試劑盒中的PCR：聚合酶鏈反應(yīng)(Polymerase Chain Reaction,PCR)是80年代中期發(fā)展起來的體外核酸擴(kuò)增技術(shù)。它能在一個試管內(nèi)將所要研究的目的基因或某一DNA片段于數(shù)小時內(nèi)擴(kuò)增至十萬乃至百萬倍，使肉眼能直接觀察和判斷?？蓮囊桓l(fā)、一滴血、甚至一個細(xì)胞中擴(kuò)增出足量的DNA供分析研究和檢測鑒定。PCR技術(shù)是生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中的一項革命性創(chuàng)舉和里程碑。
熒光定量PCR試劑盒基本原理：先用隨機(jī)引物將RNA反轉(zhuǎn)錄成cDNA，然后設(shè)計特異性的引物和熒光探針(TaqMan探針)，進(jìn)行熒光定量PCR檢測。TaqMan探針是一種寡核苷酸探針，它設(shè)計為與日標(biāo)序列上游引物和下游引物之間的序列配對。熒光基團(tuán)連接在探針的5’末端，而淬滅劑則在3’末端。當(dāng)完整的探針與日標(biāo)序列配對時，熒光基材發(fā)射的熒光因與3’端的淬滅劑接近而被淬滅，但在進(jìn)行延伸反應(yīng)時，qTaq聚合酶的5’外切酶活性將探針進(jìn)行酶切，使得熒光基團(tuán)與淬滅劑分離，熒光強(qiáng)度得到檢測。隨著擴(kuò)增循環(huán)數(shù)的增加，釋放出來的熒光基團(tuán)不斷積累，因此熒光強(qiáng)度與擴(kuò)增產(chǎn)物的數(shù)量呈正比關(guān)系。
熒光定量PCR試劑盒產(chǎn)品特點：
1.無需優(yōu)化反應(yīng)和循環(huán)條件，快速構(gòu)建反應(yīng)體系。
2.高靈敏度檢測，即使是低豐度的轉(zhuǎn)錄本也可以檢測。
3.試劑盒確保DNA或cDNA模板的準(zhǔn)確定量，適用于各種類型熒光定量PCR儀。
4.整合熱啟動酶的*PCR系統(tǒng)，*限度的避免非特異性擴(kuò)增。
